养殖刺参保苗期重大疾病“腐皮综合征”病原及其感染源分析

2003～2005年冬、春季,山东省和辽宁省众多养殖区域的保苗期刺参(Apostichopus japonicus)暴发了较为严重的传染性疾病-"腐皮综合征".该病波及面广,传染性强,死亡率常高达90%以上.发病症状主要表现为厌食、摇头、肿嘴、排脏、身体萎缩、口部溃烂乃至体表大面积溃疡.本研究对症状较为典型的3家海参保苗期的发病幼参进行了详细的病原学分析,从所有病参的病灶组织分离得到了1种占有绝对优势的菌株,经人工感染实验证明它对健康刺参具有较强的致病性,且感染病参的症状与自然发病海参的症状相同.通过形态学、生理生化和16S rDNA分子生物学方法对该菌进行的分类鉴定表明,导致保苗期刺参"腐皮综合征"的致病菌是假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens).同时也对3家养殖场刺参保苗养殖系统进行了分析研究.结果表明,水源中细菌含量不高,为(0.8×102)～(1.2×102)cells/mL,其特征与病灶处优势菌不同;而饵料中细菌含量最高可达3.2×106 cells/mL.饵料、池水和池底污物的优势菌与病灶处优势菌基本一致,说明饵料可能是病原菌的主要来源.本研究首次揭示了"腐皮综合征"导致保苗期刺参大规模死亡的原因及其致病原,对刺参健康养殖和病害防治具有重要的指导意义.     

农业耕地土壤中114株农药降解菌的分离与筛选

根据农田使用农药史选择灭蝇胺、氯氰菊酯、异丙威进行农药富集培养和平板划线分离,在28种长期受农药污染的不同作物耕地土壤中分离到114株农药降解菌,并用高效液相色谱法测试对吡虫啉(100μg/ml)的降解率,72 h后进行检测。结果 114株降解菌中用吡虫啉筛选到10株降解率达到25%以上的细菌,降解率为10%～25%之间的细菌为78株,降解率小于10%的细菌为26株。对农药降解效果较好的降解菌主要分布在长期大量使用农药的蔬菜作物(大姜、大葱、芦笋等)耕地土壤,而施药相对较少的果园和棉花田中降解菌的数目和降解能力偏低。     

溶藻细菌H5的分离、鉴定及溶藻特性研究

[目的]分离和鉴定溶藻细菌,研究其溶藻特性,为进一步研究溶藻细菌对水华的治理作用提供帮助。[方法]从香溪河春季水华集聚区水体中分离得到1株有高效溶藻效果的菌株(H5),采用16S rDNA序列相似性分析和Biolog微生物自动鉴定系统等对细菌进行鉴定。采用直接计数法,研究了其对汉斯冠盘藻(Stephanodiscus hantzschii)、倪氏拟多甲藻(Peridiniopsis niei)、具尾逗隐藻(Komma cau-data)的抑制效果,及对汉斯冠盘藻的溶藻作用方式。[结果]根据生理生化及16S rDNA序列分析鉴定,H5属于纺缍形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)。该菌对汉斯冠盘藻、倪氏拟多甲藻、具尾逗隐藻的溶藻率最高为71.3%,最低为57.4%。培养滤液、热处理培养滤液对汉斯冠盘藻的生长具有明显抑制作用,而细菌无细胞提取物无溶藻能力。[结论]该菌对汉斯冠盘藻有较强的溶藻效果,且是通过分泌溶藻物质溶藻。     

组成型脱硫工程菌的构建及其脱硫性能分析

[目的]研究组成型脱硫工程菌的构建及其脱硫性能。[方法]以专一性脱硫菌德氏假单胞菌Pseudomonas delafieldii R-8为出发菌株,将该菌的脱硫质粒中的脱硫基因dszABC和组成型gap基因启动子克隆到表达载体pPR9TT中,获得的组成型重组质粒pRT-C后电转化R-8-0菌,得到了组成型工程菌R-8-C,并对其脱硫性能进行了比较研究。[结果]R-8-C菌在含0.10 mmol/L Na2SO4的BSM培养基中仍然具有较高脱硫活性,在72 h内,是以二苯并噻吩(DBT)为唯一硫源时R-8脱硫活性的93%;而对照组(即原始菌R-8)几乎不能脱硫。以DBT为唯一硫源时,在不同生长时期内,R-8-C菌生长细胞的脱硫活性均高于R-8菌,且在24 h内,R-8-C菌的脱硫活性约为R-8菌的1.3倍。[结论]该研究为进一步了解脱硫基因调控机制及构建高活性脱硫工程菌奠定了基础。     

昆虫病原细菌Cip蛋白基因工程菌发酵条件的优化

昆虫病原发光杆菌属(Photorhabdus)细菌产生的2种胞内晶体蛋白CipA和CipB已在大肠杆菌原核表达系统中进行稳定表达,为进一步提高该蛋白在大肠杆菌中的表达水平,确定工程菌摇瓶培养的最适条件,研究了多种无机离子、装液量、培养基初始pH值、诱导前添加葡萄糖等因素对工程菌摇瓶发酵的影响。结果显示,在发酵培养基中添加10 mmoL/L Mg2+和15 mmoL/LPO43-,调节初始pH值至7.2,装液量为25mL(250mL摇瓶),诱导前添加10g/L葡萄糖时,Cip蛋白的表达量可明显提高,发酵条件优化后CipA和CipB的表达量达到了39%和41%。     

水稻白叶枯病专用接种装置研制

 介绍一种自行研制的水稻白叶枯病菌专用接种装置,其优点是携带轻便,操作简便,提高实验效率,可为科研人员节约大量的精力和时间,该装置菌液能自动流到进行剪叶操作的剪刀刀片上,流量可控制,而且可避免菌液在接种过程中被污染。本装置已获国家专利,专利申请号：2009201118503,专利授权号：CN201450921U。     

嗜盐紫色硫细菌283-1的耐盐机制

菌株283-1是一株中度嗜盐紫色硫细菌,对其耐盐特性和机理进行了初步研究。结果表明,菌株283-1在改良的Pfennig紫色硫细菌培养基中最大能耐受2.3mol·L-1 NaCl,其生长对Na+有专一依赖性,对Cl-依赖性较弱;它主要通过在胞内积累相容性溶质甜菜碱来对抗胞外渗透压力,胞内甜菜碱的含量随培养基中NaCl浓度增加而增加,2.0mol·L-1 NaCl时浓度可达到156.4mg·g-1干重。外源添加甜菜碱可以明显提高该菌株耐盐生长的能力。     

叶绿素降解菌的筛选与应用

以叶绿素为培养基成分,在不添加无机盐的条件下,从土壤中分离筛选得到一株能降解叶绿素的菌株;经过形态学鉴定,确定它为曲霉属中的一种,菌株命名为GLHZB319,保藏在中国典型培养物保藏中心内,保藏编号为CCTCC No:M2011101.在温度为30℃、摇床转速100 r/min、自然pH、GLHZB319菌株接种孢子量为1.0×106个/mL的培养条件下,把100 mL的叶绿素水溶液培养3d,溶液的吸光度值由0.310降解到0.002,降解率达到99％.     

拮抗菌应用于微生物杀菌剂的研究现状及展望

微生物杀菌剂作为生物农药的一种,在植物病害防治中发挥着巨大的作用。综述了近年来桔抗细菌、拈抗真菌、拮抗放线菌应用于微生物杀菌剂的研究现状,着重分析了其生防机制和应用以及研究过程中产生的问题,并对其今后的发展进行了展望。     

毛细管电泳与芯片电泳技术在转基因食品检测中的研究进展

大量的转基因生物体作为食品进入人们的生活,灵敏、快速、特异的检测方法对保护消费者的知情权和选择权、保障转基因标签制度的顺利实施起到了举足轻重的作用。毛细管电泳和芯片电泳作为新兴的分离技术,以其高通量、高灵敏度、快捷低耗的优势弥补了传统凝胶电泳的不足。对目前常用的转基因食品检测方法进行归纳和评价,并重点综述了近年来毛细管电泳与芯片电泳技术在转基因食品检测中的研究进展。